研究設(shè)計(jì)分為急性毒性實(shí)驗(yàn)和慢性毒性實(shí)驗(yàn)兩部分,全面評(píng)估了污染物在不同生命階段的影響。
實(shí)驗(yàn)對(duì)象
模式生物:研究選用了Oryzias melastigma。這種小魚(yú)體型小、世代周期短、易在實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng),是環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的理想模型。
受精卵收集:研究人員從健康的成魚(yú)中收集受精卵,經(jīng)過(guò)一系列嚴(yán)格的消毒步驟,挑選出發(fā)育同步、健康的胚胎用于實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)溶液的制備
本研究設(shè)置了兩種暴露源,以進(jìn)行比較:
氯化鋁(AlCl?)溶液:通過(guò)溶解AlCl?, 6H2O于海水中,制備含鋁的母液;
GACP溶液:研究人員搭建了一個(gè)電化學(xué)裝置,通過(guò)外加電流促使真實(shí)的鋁基原電池陽(yáng)極(成分與工業(yè)用一致)在海水中溶解,從而獲得含有鋁、鋅、鐵、銦等多種元素的真實(shí)“混合物"母液。
所有母液均經(jīng)過(guò)沉淀和過(guò)濾,將這些母液稀釋成一系列濃度梯度,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
急性毒性實(shí)驗(yàn)(胚胎-仔魚(yú)階段)
暴露方式:將海洋Oryzias melastigma胚胎分別暴露于不同濃度的氯化鋁溶液、GACP溶液以及陰性對(duì)照(清潔海水)和陽(yáng)性對(duì)照(3,4-dichloroaniline)中,持續(xù)12天,直至孵化(圖1)。
觀(guān)測(cè)指標(biāo):
發(fā)育毒性:每天在顯微鏡下觀(guān)察胚胎發(fā)育情況,記錄死亡率、孵化率、孵化時(shí)間以及各種形態(tài)畸形(如脊柱彎曲、心包水腫等)。
生長(zhǎng)指標(biāo):在12天后,測(cè)量仔魚(yú)的體長(zhǎng)。
實(shí)驗(yàn)使用了諾達(dá)思的斑馬魚(yú)行為軌跡跟蹤系統(tǒng)(DanioVision)。將仔魚(yú)放入24孔板,適應(yīng)后,經(jīng)歷“黑暗-光照-黑暗-光照"的特定光刺激序列。系統(tǒng)通過(guò)動(dòng)物運(yùn)動(dòng)軌跡跟蹤系統(tǒng)(EthoVision XT)自動(dòng)記錄仔魚(yú)在每個(gè)階段的運(yùn)動(dòng)距離、路徑彎曲度和在孔中間停留的時(shí)間。評(píng)估幼魚(yú)的運(yùn)動(dòng)能力和對(duì)光刺激的應(yīng)激反應(yīng)。